Узнавайте о продуктах и событиях нашей компании самыми первыми.
Это просто и бесплатно.

ДИАХИМ- ЦИТОСТЕЙН-ХЭ Набор реагентов для цитохимического определения хлорацетатэстеразы в лейкоцитах

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ

ДИАХИМ- ЦИТОСТЕЙН-ХЭ

Набора реагентов для цитохимического определения хлорацетат эстеразы в лейкоцитах

НАЗНАЧЕНИЕ

Реакция на нафтол-АSD-хлорацетатэстеразу, наряду с миелопероксидазой и реакцией на липиды с суданом черным Б,  является маркерной для выявления клеток миелоидной серии, особенно лейкозных миелобластов.

ПРИНЦИП РЕАКЦИИ

Субстратом неспецифических эстераз являются эфиры карбоновых кислот. Метод основан на том, что азокраситель, образующийся при сочетании освобождающегося при гидролизе альфа-нафтола с различных стабилизированными диазотами, осаждается в месте локализации фермента в нейтральной среде.

В цитоплазме клетки определяются мелкие синефиолетовые гранулы.

РЕАГЕНТЫ

Набор обеспечивает 10 исследований

Вошедшие  в набор:

1.       Нафтол-АSD-хлорацетат

2.       Трис-буфер ( рН 7,1)

3.       Прочный синий Р.Р.

Не вошедшие в набор:

1.       10% спирт-формалин;

2.       Ацетон;

3.       Дистиллированная вода;

4.       Краситель «Диахим-ЦитоСтейн-ГМ» (гематоксилин Майера).

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧЕГО РАСТВОРА

1.       Содержимое флакона нафтол-АSD-хлорацетата растворить в 0,1 мл ацетона, добавить 5 мл дистиллированной воды и 5 мл трис-буфера .

2.       К полученному раствору добавить 10мг прочного синего РР.

3.       Смешать, отфильтровать.

Данного количества раствора достаточно для окраски 4-5 стекол.

ХОД РЕАКЦИИ

Зафиксировать мазки в 10% спирт - формалиновой смеси. Сухие мазки крови или костного мозга поместить для фиксации в емкость с 10% раствором

формалина на этиловом спирте - 30сек. 

Промыть дистиллированной водой.

Поместить в рабочий раствор при комнатной температуре 30мин.

Промыть проточной водой 5 мин.

Докрасить ядра гематоксилином Майера. 15мин.

Промыть стекла в проточной воде 10сек.

Высушить.

Примечание:

Цитохимические исследования проводят в мазках крови, костного мозга, лейкоконцентрата, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфоузлов, селезенки, лейкозных инфильтратах разной локализации.

Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов.

При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови.

Используются только свежие,нативные, сухие препараты, которые должны сохнуть на воздухе не менее 30 минут.

Препараты фиксируют сразу после высушивания на воздухе.

Зафиксированные мазки могут храниться в темноте, при комнатной температуре, в течение 3 дней.

РЕЗУЛЬТАТЫ ОКРАСКИ

Хлорацетатэстераза выявляется в виде сине-фиолетовых гранул в цитоплазме клеток гранулоцитарного ряда. В моноцитах и лимфоцитах этот фермент отсутствует.

 

дизайн и разработка
Segmenta media. 2009