Узнавайте о продуктах и событиях нашей компании самыми первыми.
Это просто и бесплатно.

ДИАХИМ – Набор для окраски по ГРАМУ (с сафранином)

ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ

ДИАХИМ - НАБОР ДЛЯ ОКРАСКИ ПО ГРАМУ

Набор реагентов для окраски микроорганизмов по Граму (с сафранином)

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов для окраски по Граму предназначен для окраски микроорганизмов и выявления принадлежности бактерий к грамположительным или к грамотрицательным группам.

 ПРИНЦИП РЕАКЦИИ

Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристалвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.

Грамотрицательные Грам (-) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются сафранином, приобретая красный цвет.

РЕАГЕНТЫ

Набор обеспечивает  200 исследований (исходя из 0,5 мл на одно исследование).

1.  Карболовый раствор генцианвиолета    1 фл  (100 мл)

2.  Раствор Люголя                                           1 фл  (100 мл)

3. Раствор сафранина                                      1 фл  (100 мл) 

 

ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

Предметное стекло перед проведением исследования должно быть тщательно вымыто и обезжирено смесью для обезжиривания предметных стекол пр-ва «АБРИС+».

Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова , жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10-15 минут и затем высушивают на воздухе .

Либо полученные мазки тщательно высушивают и затем фиксируют сухим жаром. Фиксация достигается посредством несильного нагревания (примерно до 70°С) предметного стекла, которое для этого трижды проводят над пламенем спиртовки мазком вверх.

МЕТОДИКА ОКРАСКИ

1. Помещают на мазок полоску фильтровальной бумаги и наносят на фиксированный мазок  несколько капель карболового раствора генцианвиолета (реагент 1) и выдерживают 2-3 минуты. Сливают краску, удаляют фильтровальную бумагу и споласкивают в проточной воде  (до 30 сек).

2.  Мазок заливают на 1-2 мин раствором Люголя (реагент 2)  до почернения препарата.

3.  Раствор сливают, мазок промывают водой (водопроводной или дистилированной).

4.  Дифференцируют 96° спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцветится мазок (приблизительно 20-60 секунд). Во время дифференцировки препарат все время покачивают. Если вместо спирта использовать ацетон, то промывание продолжается 30 сек. Можно дифференцировать смесью спирта и ацетона (1:1) 30 с.

5. Тщательно промывают стекло в проточной или дистиллированной воде 1-2 мин

 

6. Для выявления грамотрицательной группы бактерий препараты дополнительно окрашивают  раствором сафранина (реагент 3) (несколько капель) в течение 2-3 минут.

7.  Промывают в проточной воде и высушивают фильтровальной бумагой.

8.  Окрашенные мазки исследуют в масле, с иммерсионным объективом; при желании заключают в бальзам, в таком случае на окрашенный и хорошо высушенный мазок кладут каплю бальзама и покрывают покровным стеклом.

РЕЗУЛЬТАТ ОКРАСКИ

Грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый цвет (темно-синий), а грамотрицательные - розово-красный, красный или коричневый.

 

дизайн и разработка
Segmenta media. 2009