ДИАХИМ-РЕАГЕНТЫ ДЛЯ КАМЕРЫ ГОРЯЕВА

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА:

1. Подсчет лейкоцитов:

1.      Исследуемую кровь разводят в 20 раз, для этого в сухую пробирку набирают 0,4 мл Реагента и 0,02 мл крови (можно использовать стабилизированную венозную кровь);
2.      Тщательно перемешивают (пипетируют) и оставляют на 20-30 мин;
3.      Подготавливают камеру Горяева;
4.      Заполняют ее перемешанной разведенной кровью с реагентом;
5.      Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин для оседания лейкоцитов.

Подсчет проводят не позднее 2-4 часов после взятия крови. Производят подсчет лейкоцитов при малом увеличении (окуляр 10х, объектив 8х) подсчитывают лейкоциты в 100 больших квадратах, что соответствует 1600 малым. Лейкоциты считаются по всей сетке в больших квадратах, не разделенных на малые квадраты и полосы, начиная с верхнего левого угла сетки. Считают клетки, расположенные внутри квадрата и лежащие на любых двух линиях, чтобы дважды не подсчитывать одну и ту же клетку.

Расчет числа лейкоцитов в 1 мкл крови производят по формуле:
Х = а х 250 х 20 / 100 = а х 5000 / 100 = а х 50
где Х – число лейкоцитов в 1 мкл крови,
       а - число лейкоцитов, сосчитанных в 100 больших квадратах счетной камеры,
      20 – разведение крови,
      100    - число больших квадратов,
      250ˉ¹мм² - площадь одного большого квадрата.

2. Подсчет эритроцитов:

1.     Исследуемую кровь разводят в 200 раз, для этого в сухую пробирку набирают 4 мл Реагента и 0,02 мл крови;
2.     Тщательно перемешивают (пипетируют) и оставляют на 20-30 мин;
3.     Подготавливают камеру Горяева;
4.     Заполняют ее перемешанной разведенной кровью с реагентом;
5.     Заполненную камеру оставляют в горизонтальном положении на 1 мин для оседания эритроцитов.

Подсчет проводить не позднее 3 часов после взятия крови. Производят подсчет эритроцитов в 5 больших квадратах, разделенных на 16 малых, т.е. в 80 малых квадратах. Рекомендуется считать клетки в квадратах, расположенных по диагонали сетки.
Расчет числа эритроцитов в 1 мкл крови производят по формуле:
Х = а х 4000 х 200 / 80 = а х 800 000 / 80 = а х 10 000
где Х – число эритроцитов в 1 мкл крови,
       а - число эритроцитов, сосчитанных в 5 больших квадратах счетной камеры,
      200 – разведение крови,
      80 - число малых квадратов,
      4000ˉ¹мм² - площадь одного малого квадрата.

Примечание. Вся используемая стеклянная посуда и камера Горяева должны быть тщательно вымыты, иначе грязевые и пылевые частицы, сходные по размеру с эритроцитами, могут быть ошибочно учтены при подсчете.

3. Подсчет тромбоцитов:

Для подсчета тромбоцитов используется венозная кровь. В качестве антикоагулянта применяется ЭДТА. При взятии капиллярной крови из пальца высока вероятность агрегации тромбоцитов. Перед исследованием необходимо убедиться в отсутствии сгустков крови.

1.     Исследуемую кровь разводят в 200 раз, для этого в сухую пробирку набирают 4 мл Реагента и 0,02 мл крови;
2.     Перемешивают и оставляют на 20-30 мин для гемолиза эритроцитов;
3.     Подготавливают камеру Горяева;
4.     Заполняют ее перемешанной разведенной кровью с реагентом;
5.     Счетную камеру помещают во влажную среду (чашка Петри с влажной фильтровальной бумагой) на 5 мин для оседания тромбоцитов.

Используется объектив 40х, производят подсчет тромбоцитов в 25 больших квадратах счетной камеры.

Тромбоциты выглядят как мелкие, хорошо преломляющие свет образования.

Расчет числа тромбоцитов в 1 мкл крови производят по формуле:
   Х = а х 250 х 200 / 25 = а х 50 000 / 25 = а х 2 000
где Х – число тромбоцитов в 1 мкл крови,
       а - число тромбоцитов, сосчитанных в 25 больших квадратах счетной камеры,
      200 – разведение крови,
      25 - число больших квадратов,
      250ˉ¹мм² - площадь одного большого квадрата.
Практически число сосчитанных тромбоцитов умножают на 2000. В пересчете на 1 л крови умножают на 1000000.

Примечание. Вся используемая стеклянная посуда и камера
Горяева должны быть тщательно вымыты, иначе грязевые и пылевые частицы, сходные по размеру с тромбоцитами, могут быть ошибочно учтены при подсчете.